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超實(shí)用干貨(一) | 如何選擇合適的C18色譜柱?

檢測(cè)樣品:肉蓯蓉

檢測(cè)項(xiàng)目:含量測(cè)定

方案概述:十八烷基硅烷(常被稱為ODS 或C18)是最早的鍵合固定相之一,C18是具有烷基鏈的硅烷化劑與硅膠表面的硅醇基反應(yīng)制得的鍵合相。因?yàn)槭褂昧斯矁r(jià)鍵和的方式將烷基鏈緊緊固定在硅膠表面,所以烷基鏈不會(huì)被流動(dòng)相沖洗掉,作為色譜固定相穩(wěn)定發(fā)揮作用。

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更新時(shí)間2024年09月10日

上傳企業(yè)浙江福立分析儀器有限公司

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《中國(guó)藥典》中涉及使用液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)的品種,以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱應(yīng)用最為廣泛。

十八烷基硅烷(常被稱為ODS 或C18)是最早的鍵合固定相之一,C18是具有烷基鏈的硅烷化劑與硅膠表面的硅醇基反應(yīng)制得的鍵合相。因?yàn)槭褂昧斯矁r(jià)鍵和的方式將烷基鏈緊緊固定在硅膠表面,所以烷基鏈不會(huì)被流動(dòng)相沖洗掉,作為色譜固定相穩(wěn)定發(fā)揮作用。

 

然而多數(shù)情況《中國(guó)藥典》僅指明色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠,卻沒(méi)有明確的規(guī)格信息。C18色譜柱因鍵合方式、粒徑、長(zhǎng)度、內(nèi)徑等諸多因素呈現(xiàn)出不同選擇性。目前市場(chǎng)上的C18色譜柱種類眾多,而《中國(guó)藥典》又缺少選柱詳細(xì)指導(dǎo),使得色譜分析工作者執(zhí)行藥典推薦方法選擇合適色譜柱的時(shí)候,會(huì)感到非常困惑。

 

本文將以2020版《中國(guó)藥典》中肉蓯蓉的含量測(cè)定為例,從色譜柱的碳載量、柱長(zhǎng)和填料基質(zhì)個(gè)維度闡述如何選擇一支合適的液相色譜柱。

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如圖所示,2020版《中國(guó)藥典》中肉蓯蓉的含量測(cè)定中,色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn),僅有色譜柱填料類型,無(wú)具體規(guī)格。我們選擇了4種C18色譜柱(見(jiàn)表)對(duì)肉蓯蓉的對(duì)照品分別進(jìn)行了分析測(cè)試。

 

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①藥典里注明“以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑”且沒(méi)有特別指明規(guī)格明細(xì)的情況下,色譜柱的規(guī)格我們一般就選HPLC上常用的規(guī)格:柱長(zhǎng)250 mm,內(nèi)徑4.6 mm,粒徑5 μm。流動(dòng)相pH在色譜柱pH使用范圍內(nèi)的前提下,選在中藥飲片分析中通用性強(qiáng)的全多孔型色譜柱1,碳載量為15%。 

 

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在藥典的流動(dòng)相梯度下,肉蓯蓉的對(duì)照品溶液中毛蕊花糖苷未被洗脫下來(lái),需要延長(zhǎng)流動(dòng)相的梯度毛蕊花糖苷才能出峰。雖然松果菊苷的塔板數(shù)達(dá)到了藥典的要求,但分析效率偏低。

 

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②優(yōu)化柱長(zhǎng)。一般來(lái)說(shuō)柱越短,分離所需時(shí)間越短。選用全多孔型色譜柱2,碳載量為15%,柱長(zhǎng)150 mm,內(nèi)徑4.6 mm,粒徑5 μm。

 

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在藥典的流動(dòng)相梯度下,肉蓯蓉的對(duì)照品溶液中中毛蕊花糖苷未被洗脫下來(lái),需要延長(zhǎng)流動(dòng)相的梯度毛蕊花糖苷才能出峰。并且松果菊苷的塔板數(shù)也只是勉強(qiáng)滿足藥典的要求。這就意味著色譜柱的壽命也不會(huì)很長(zhǎng)。對(duì)于分析工作者來(lái)說(shuō),這不是一個(gè)高性價(jià)比的選擇。


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③優(yōu)化碳載量。一般來(lái)說(shuō),碳載量越小,色譜柱的疏水作用能力越弱,對(duì)物質(zhì)的保留越弱。選用全多孔型色譜柱3,碳載量為15%,柱長(zhǎng)250 mm,內(nèi)徑4.6 mm,粒徑5 μm。

 

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果:和色譜柱1同樣的色譜條件下,雖然保留時(shí)間均有所提前,松果菊苷的塔板數(shù)也達(dá)到了藥典的要求,但總分析時(shí)間也已經(jīng)接近60分鐘了,分析效率仍然較低。

 

 

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④優(yōu)化硅膠顆粒類型,選用核殼型填料色譜柱4。

 

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全多孔型填料色譜柱更為常見(jiàn),鍵合相種類更多;

 

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核殼型填料色譜柱相對(duì)于全多孔型色譜柱而言,具有高柱效、快速分析的優(yōu)勢(shì)。

 

 

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果:肉蓯蓉中的松果菊苷和毛蕊花糖苷的檢測(cè),整體分析時(shí)間在40分鐘以內(nèi),優(yōu)化了分析效率,同時(shí)理論塔板數(shù)也滿足藥典要求。

 

 

 

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不同C18色譜柱之間的保留行為差別很大,選擇合適的C18色譜柱是藥物分析工作的重點(diǎn)。目前使用《中國(guó)藥典》未能對(duì)各品種項(xiàng)下的C18色譜柱進(jìn)行品牌和規(guī)格方面的規(guī)定。所以在藥物分析工作中,要注意到C18色譜柱之間的差異,并挑選合適的C18色譜柱來(lái)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)分析。

 

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